#coding=utf-8
lines=[]
f=open("d:\\1script\\1.txt",'r')  #your path!
for line in f:
    lines.append(line)
f.close()
print lines
lines.insert(3,"666\n")           #第四行插入666并回车
s=''.join(lines)
f=open("d:\\1script\\1.txt",'w+') #重新写入文件
f.write(s)
f.close()
del lines[:]                      #清空列表
print lines